共聚焦顯微鏡與傳統(tǒng)的寬視場(chǎng)光學(xué)顯微鏡相比具有多種優(yōu)勢(shì)，包括控制景深，消除或減少遠(yuǎn)離焦平面的背景信息（導(dǎo)致圖像質(zhì)量下降）的能力，以及收集串行光學(xué)部分的能力來(lái)自厚厚的標(biāo)本。共聚焦方法的基本關(guān)鍵是使用空間濾波技術(shù)消除厚度超過(guò)直接焦平面的樣本中的焦外光或眩光。近年來(lái)共聚焦顯微鏡的普及程度出現(xiàn)了巨大的爆炸性增長(zhǎng)，部分原因在于從傳統(tǒng)熒光顯微鏡制備的樣品中獲得極高質(zhì)量圖像的相對(duì)容易性，以及細(xì)胞生物學(xué)應(yīng)用的增加這依賴于固定和活細(xì)胞和組織的成像。實(shí)際上，共焦技術(shù)被證明是光學(xué)顯微鏡中有史以來(lái)最重要的進(jìn)步之一。(蒲柘光電顯微鏡版塊發(fā)布)
在傳統(tǒng)的寬場(chǎng)光學(xué)落射熒光顯微鏡中，樣品發(fā)出的二次熒光經(jīng)常通過(guò)激發(fā)體積發(fā)生，并且模糊了位于物鏡焦平面中的特征的分辨率。較厚的試樣（大于2微米）使問(wèn)題復(fù)雜化，這通常表現(xiàn)出如此高的熒光發(fā)射，大部分精細(xì)細(xì)節(jié)都會(huì)丟失。共聚焦顯微鏡在軸向（z ;沿光軸）和橫向（x和y）方面僅提供了微小的改善; 在樣本平面中）光學(xué)分辨率，但是能夠從焦平面移除的區(qū)域中排除二次熒光而不是所得到的圖像。盡管共聚焦顯微鏡相對(duì)于傳統(tǒng)的寬場(chǎng)技術(shù)在某種程度上提高了分辨率，但它仍遠(yuǎn)低于透射電子顯微鏡。在這方面，共聚焦顯微鏡可以被認(rèn)為是這兩種經(jīng)典方法之間的橋梁。(蒲柘光電顯微鏡版塊發(fā)布)
圖1中顯示了一系列圖像，這些圖像比較了傳統(tǒng)寬場(chǎng)和激光掃描共聚焦熒光顯微鏡中的選定視場(chǎng)。在寬場(chǎng)熒光中熒光染色的人髓質(zhì)的厚切片顯示出來(lái)自焦平面上方和下方的熒光結(jié)構(gòu)的大量眩光（圖1（a））。當(dāng)用激光掃描共聚焦顯微鏡成像時(shí)（圖1（d）），髓質(zhì)厚部分顯示出顯著程度的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)。同樣地，用熒光素染色的整個(gè)兔肌纖維的寬場(chǎng)熒光成像產(chǎn)生模糊圖像（圖1（b））缺乏細(xì)節(jié)，而相同的樣品場(chǎng)（圖1（e））顯示共聚焦顯微鏡中的高度條紋形貌。向日葵花粉粒中的自發(fā)熒光產(chǎn)生基本外部形態(tài)的模糊輪廓（圖1（c）），但沒(méi)有表明內(nèi)部結(jié)構(gòu)。相比之下，采用共聚焦技術(shù)獲得的相同顆粒（圖1（f））的薄光學(xué)部分顯示出顆粒核心與周圍包絡(luò)之間的顯著差異。(蒲柘光電顯微鏡版塊發(fā)布)
（文章轉(zhuǎn)自olympus-lifescience）